Night at the Museum: Battle of the Smithsonian bölümünde, Washington, DC. Smithsonian Enstütüsü'ne doğru yola çıkıyoruz. Burası gündüzleri her sıradan müzede olduğu gibi misafirlerini ağırlayıp mesai bittikten sonra ise kapılarını kapatan klasik bir müzedir. Ancak kapanan kapılar ardında kalan şeyler için gece de aynı şeyler söylenebilecek midir? Ziyaretçiler gittikten sonra birden canlanan dünyada artık var olmayan nesli tükenmiş hayvanlar, tarihte kahraman olarak bilinen karakterler ve daha niceleri müzenin koridorlarında koşturmaya başlarlar. Ancak bir sıkıntı vardır. Müzenin içinde onları bekleyen bir tehlike vardır. Bu hepsinin canına mal olabilecek büyük bir tehlikedir. Peki müzenin bekçisi olan Larry Daley onları bu tehlikeden kurtarmayı başarabilecek midir?