Brooklyn'den gelen tesisatçı Mario, bir prenses olan Peach ve bir mantar olan Toad ile birlikte Mantar Krallığı'nda unutulmaz bir yolculuğa çıkar. Bu macerada Mario'nun sevgili kardeşi Luigi'yi bulma göreviyle yanı sıra, dünyayı acımasız ateş nefesli Koopa olan Bowser'ın karanlık tuzağından kurtarma misyonu da onları beklemektedir. Bu büyülü yolculukları boyunca, Mantar Krallığı'nın gizemli diyarlarını keşfederler. Canlı mantar ormanlarından lav akıntılarına, buzlu kalelerden bulutların üzerindeki krallıklara kadar birbirinden çeşitli ve büyüleyici yerleri ziyaret ederler. Yolda farklı yaratıklarla tanışır, bazıları yardımseverken bazıları ise düşmanca davranır.
